تشخیص باکتری های اشریشیا کلی و شیگلا با استفاده از تکثیر همدمای حلقوی dna

اشریشیا کلی انتروهموراژیک و شیگلا باسیل های گرم منفی متعلق به خانواده انتروباکتریاسه هستند که نگرانی عمومی غالب در کشورهای توسعه یافته و کشورهای در حال توسعه می باشند. به علت اینکه دز آلوده کنندگی در این باکتری ها پایین است، نقش روش های تشخیصی در این زمینه اهمیت یافته است. برای تشخیص این باکتری ها روش های تشخیصی مرسوم مانند کشت آن ها و تست های بیوشیمیایی استفاده می-شود که روش های پیچیده، پر زحمت و وقت گیری هستند. بنابراین به روش های سریع تری نیاز می باشد. اخیرا چندین روش مولکولی ارزشمند گسترش یافته اند که در زمینه های تشخیصی کاربرد دارند، مانندpcr و real-time pcr. هدف این مطالعه بررسی تکثیر همدمای حلقوی (lamp) dna برای تشخیص سریع، حساس و اختصاصی اشریشیا کلی o157:h7 و سویه های شیگلا بود. ما همچنین قصد داشتیم روش lamp را با pcr مقایسه کنیم. شش آغازگر اختصاصی شناسایی کننده dna هدف در ژن rfbe اشریشیا کلی o157:h7 و چهار آغازگر شناسایی کننده dna هدف در ژن ipah شیگلا مورد استفاده قرار گرفتند. آغازگرهای f3 و b3 واکنش lamp در pcr نیز استفاده شدند. dna باکتریایی متعلق به سویه استاندارد اشریشیا کلی o157:h7 و dna پلاسمیدی سویه های شیگلا با استفاده از روش های جداسازی استاندارد استخراج شدند. lamp و pcr تحت شرایط بهینه انجام شدند. اختصاصیت این روش ها با استفاده از چندین سویه باکتریایی مرتبط و غیر مرتبط بررسی شد. حساسیت روش ها نیز با رقیق سازی های متوالی dna الگو بررسی شد. محصولات lamp و pcr در ژل آگارز 2 و 1 % الکتروفورز شدند و در اتیدیوم بروماید رنگ آمیزی شده و تحت نور uv قرار گرفتند. تحت شرایط مناسب هر دو واکنش برای هر دو باکتری، باندهای مورد نظر ایجاد شدند. در واکنش lamp رسوب سفیدرنگی در تیوب هایی که تکثیر در آن ها رخ داده بود مشاهده شد. هنگامی که سویه های باکتریایی مرتبط و غیر مرتبط مورد آزمون lamp قرار گرفتند، هیچ تکثیری در آن ها مشاهده نشد. ولی در pcr برخی سویه ها تشخیص داده شدند. روش lamp توانست dna را تا رقت 4- 10 شناسایی کند ولی pcr تا رقت 2- 10را تشخیص داد. در نتیجه lamp بسیار حساس تر از pcr است. lamp روش قابل اعتمادی برای تشخیص اشریشیا کلی o157:h7 و سویه های شیگلا در آزمایشگاه های کلینیکی می باشد. lamp روشی ساده و ارزان است که می تواند dna هدف را به سرعت تشخیص دهد. نتایج تایید کردند که روش lamp روشی سریع، حساس و اختصاصی در تشخیص اشریشیا کلی o157:h7 و روشی سریع در تشخیص شیگلا می باشد.